電源明緯信號線安普發(fā)散角1.2穩(wěn)定行3%光斑00模機箱鋁合金
基因測試光遺傳學激光器
光遺傳學是一個蓬勃發(fā)展的多學科生物工程技術(shù),結(jié)合了重組DNA技術(shù)與光學技術(shù),對細胞生物學的研究非常有用,具有特的高時空分辨率和細胞類型特異性的特點,克服了傳統(tǒng)手段控制細胞或有機體活動的許多缺點。光遺傳學被廣泛應用于活細胞內(nèi)目標蛋白質(zhì)的跟蹤以及選擇性地控制腦中某類細胞的特定的神經(jīng)活動從而推動了神經(jīng)科學研究的深入。近來光遺傳學的應用拓展到了信號傳導的研究,也開始有醫(yī)學臨床的應用的報道。

流式細胞儀簡易原理多維細胞術(shù)的挑戰(zhàn)
熒光信號的波長總是比激光激發(fā)的波長要長(斯托克斯位移)。這種偏移允許使用帶通濾波器和截止濾波器的組合有效地將熒光與散射激光分離。理輪上我們可以通過在激發(fā)曲線的峰值位置處去激發(fā)熒光染料,以此來達到大的信噪比。在多維流式細胞術(shù)的應用中,試劑組通常由多種熒光染料組成,這些熒光染料經(jīng)過精心挑選,以確保它們都具有不同的激發(fā)和熒光光譜。這對于使儀器能夠分離信號并由此確定每個細胞附著多少熒光染料至關(guān)重要,這反過來又使儀器能夠明確的確定它是什么類型的細胞。
然而,問題和挑戰(zhàn)在于激發(fā)光譜和熒光發(fā)射光譜都非常寬且具有長尾,因此彼此間不可避免地會出現(xiàn)一些串擾,每種細胞類型表達多少特定蛋白質(zhì)也存在著自然差異。 儀器設(shè)計師們的任務(wù)是將終數(shù)據(jù)中的串擾和變異系數(shù) (CV) 降至低。
公認的方法(見上圖)涉及交錯激發(fā)波長和熒光檢測窗口。每個檢測窗口中的信號相互繪制以產(chǎn)生“散點圖”。在尋找已知和新細胞類型的研究應用中,這些圖通常是相互雜糅的。在臨床實驗室中,大量的測試使這種監(jiān)督分析變得不切實際,而是使用多變量計算機分析來自動確定每個細胞的身份。

更多波長意味著更高的性能
為了大限度地增加可分析蛋白質(zhì)和細胞類型的數(shù)量,理想的方式是采用波長間隔較遠且間距均勻的激發(fā)光,當儀器可以測量的光譜帶寬越大時,就越容易容納更多相互分立的波長,在這種情況下,我們就可以適當?shù)膶⒖梢姽庾V拓展到紫外和近紅外區(qū)域。
一直以來,因為激光波長的選擇過少,我們在這方面并沒有獲取到實質(zhì)的優(yōu)解。 例如,488 nm 波長(初從氬離子激光器獲得)仍然是流式細胞術(shù)中事實上的標準藍色激光波長,盡管在該應用中很少使用氬離子激光器。 同樣,初從二極管泵浦固態(tài) (DPSS) 激光器獲得的 532nm 和 561 nm 波長仍然是的綠色和黃色波長。
然而,隨著激光技術(shù)的發(fā)展,更多的激光波長被科研工作者們發(fā)現(xiàn)并利用,激光現(xiàn)在就可以在可見光和近紅外范圍內(nèi)為流式細胞術(shù)提供許多新波段的激光光源,填補之前因為激光波長單一造成的空白。例如,552 nm現(xiàn)在在黃色窗口中能夠作為561 nm 波長的替代品,它可以減少與橙色和紅色激發(fā)熒光染料的串擾。 由于減少了與綠色激發(fā)熒光染料的串擾,457 nm激光器現(xiàn)在也是488 nm激光器作為藍色窗口標準的有力競爭。